Igh kutatás - asszisztens az emlőrák biológiájának megfejtésében

Annak ellenére, hogy egyre több klinika kezdi alkalmazni a daganatok genetikai fenotipizálásának módszereit, az IHC-kutatások továbbra is a fő asszisztensek maradnak az emlőrák biológiájának dekódolásában, annak további fejlődésének előrejelzésében, a tervezett kezelésre adott tumor válaszreakciójának „előrejelzőjeként”..

Ebben a cikkben megtudhatja: mi az immunhisztokémiai (IHC) vizsgálat, mi az IHC jelentősége az emlőrákban.

Hisztokémia (festési szakaszok a szövettanban)

Mielőtt a patológus (morfológus) mikroszkóp alatt vizsgálni kezdné a ben kapott mellszövet területét biopszia eredménye, speciális festékekkel kell festenie.

A hisztokémiai festékeket egy vékony szövetrészre viszik fel, hogy mikroszkóp alatt lássák, milyen sejtek vannak ott, elhelyezkedésük egymáshoz viszonyítva (szövetszerkezet). A fénymikroszkópia rutin technika a foltos szövetszakaszok vizsgálatára, és széles körben használják az emlőrák diagnosztizálásában. A szövetszelvények festésére a leggyakrabban a következőket használják:

• Hematoxilin - sötétkék színűre festi a sejtmagot;
• Eozin - rózsaszínűvé teszi a sejtek citoplazmáját. Ezek együttes használatát hematoxilin-eozin festésnek nevezzük..

Mi az immunhisztokémia (IHC)

A patológus olyan orvos, aki hosszú ideig orvosi egyetemen tanult, hogy miként tudja megkülönböztetni a rákos sejteket a normál sejtektől egy foltos szövetszakaszban mikroszkóp segítségével. Általában a diagnózis felállításához (legyen az jóindulatú vagy rosszindulatú) elegendő, ha mikroszkóp alatt megvizsgálja a hematoxilinnal és az eozinnal festett szövetszakaszt. De néha ez nem elég. Ilyen helyzetben az immunhisztokémia segít megmenteni, amely immunológiai komponenst ad hozzá a sejtek és szövetek morfológiai azonosításához..

Az immunhisztokémiai (IHC) technológia kiegészíti a sejtek és szövetek morfológiai felismerését ismert antigének elleni antitestekkel, amelyek specifikusak bizonyos sejttípusokra vagy sejtkomponensekre. Ezen antitestek elhelyezkedése fénymikroszkóppal látható, mivel az antitestek vizuálisan felismerhető jelzéseket tartalmaznak.

Az emlőrák immunhisztokémiai elemzésének első módszerein antitesteket alkalmaztak, amelyekhez fluoreszcens címkéket használtak, amelyekhez speciális fluoreszcens mikroszkóp használatára volt szükség az antitestek lokalizációjának a mellszövet egy részében történő megtekintéséhez..

Az elmúlt 30 év során jelentősen le lehetett egyszerűsíteni az emlőmirigy IHC vizsgálatában alkalmazott technikát, specifikusabb antitestek (monoklonális antitestek) alkalmazásával, enzimatikus jelöléssel. Ez pedig lehetővé tette a fénymikroszkópia alkalmazását az emlőmirigy immunohisztológiai vizsgálataihoz, amely sokkal olcsóbb és ezért a leginkább hozzáférhető. Az időnként nélkülözhetetlen radioaktív elemek (peroxidáz, lúgos foszfatáz és fluoreszcein) azonban speciális technikákat igényelnek, és még mindig széles körben alkalmazzák őket..

Az immunhisztokémia alkalmazásának szükségessége a mellrák, minőségének ellenőrzését és a kapott eredmények értelmezését a patomorfológiai osztálynak kell ellenőriznie. Fontos, hogy az IHC vizsgálat során kapott adatok dekódolását csak a mellszövetek hematoxilinnel és eozinnal történő festése eredményeként kapott morfológiai elemzéssel kombinálva alkalmazzuk..

Ma az emlőrák immunhisztokémiai vizsgálata a legtöbb morfológiai (kóros) laboratóriumban rutinszerű módszer, amelyet a diagnózis tisztázására, valamint prognosztikai célokra használnak, mint prediktív (prediktív) mutatót arra vonatkozóan, hogy az emlőrák hogyan fog viselkedni a jövőben..

Az emlőrák és az IHC diagnózisa

Amikor egy patológus mikroszkóp alatt vizsgálja a biopsziás anyagot, két fő diagnosztikai feladata van: meghatározni a tumorsejtek eredetét, ahol megjelentek (a csatornákban, a lobulákban vagy a mell egyéb részeiben), és megerősíteni vagy kizárni a közeli szövetekbe való inváziójukat..

Az emlőrákban alkalmazott diagnosztikai IHC markerek

Az IHC onkológiában való alkalmazásának első napjaitól kezdve új és meglévő technológiákat kerestek olyan antitestek alkalmazására, amelyek nagyfokú specifitással és érzékenységgel képesek azonosítani a sejt antigénjeit. Az alább felsorolt ​​IHC markereket jelenleg széles körben használják az emlőrák hisztopatológiai diagnózisának tisztázására:

Citokeratinok

• A CK5, CK10, CK14 és CK17 a ​​hám bazális rétegének citokeratinjai, amelyeket myoepithelialis sejtek expresszálnak.
• A CK5 / 6 vagy „bazális citokeratinok” segítenek felismerni a normális emlősejteket, mind a myoepitheliális, mind a lamináris (szekréció).
• 34β12: Ez az antitest segít felismerni az 1., 5., 10. és 14. citokeratinokat.

Sima izom markerek

• H-caldesmon. Csak a tejcsatornák myoepithelialis sejtjeiben található meg, ezért nagy a specifitása.
• Simaizom aktin (SMA). Ez az antitest segít az aktin kimutatásában a mikrofilamentumokban - alacsony specificitás, mivel az SMA megtalálható a fibroblasztokban (a regeneráló szövetekben).
• Simaizom nehézláncú miozin (SMMHC) - a simaizom miozin szerkezeti komponense az SM2 izoformában. Az emlőmirigy myoepithelialis sejtjei fejezik ki, nagy érzékenységgel és specifitással rendelkezik, mivel az SMMHC csak az emlőmirigy csatornáiban és lebenyeiben található myoepithelialis sejtekben van jelen, a mirigy kötőszövetének fibroblasztjaiban azonban hiányzik..
• Calponin - 34 kDa polipeptid modulálja az aktomiozin aktivitását. Jó érzékenység, de jelen van a mell kötőszöveti fibroblasztjaiban.
• P63-p53 homológ - nukleáris marker, nagyon érzékeny a myoepithelialis sejtekre.
• CALLA: endopeptid, amely a myoepithelialis sejtekben expresszálódik.
• P-cadherin egy sejttapadási molekula, amely nagy érzékenységet mutat a normális emlőszövet myoepithelialis sejtjeivel szemben. Nem reagál fibroblasztokkal.

Egyéb jelölők

• E-kadherin - sejtadhéziós molekula. A suti ductalis carcinoma (DCIS) és a lobularis carcinoma megkülönböztetésére szolgál. "In suti" karcinómák (LCIS) - A DCIS-t általában membránfestéssel detektálják, ellentétben az LCIS-vel, amely nem.
• Melanoma markerek: S100, Melan-A, HMB45.
• Limfocita markerekCD20, LCA, CD15, CD30.
• Érrendszeri endothel markerek: CD31, CD34, VIII. Faktor, d2-40 (podoplanin).
• Sejtproliferációs markerek: Ki67, MIB-1, PPh3.
• Apoptózis markerek: Bcl-2 és Bax, Bcl-X.

Példák az IHC alkalmazására az emlő patológiájának meghatározásában felmerülő problémák megoldására

Számos olyan helyzet fordul elő, amikor az immunhisztokémia hozzájárul a mell patológiájának végső patohisztológiai diagnózisának megfogalmazásához:

• A sejtmembrán E-kadherin festése kizárja a lobularis neopláziákat (ALH) és az LCIS-t. A sejthártya festésének hiánya a lobularis daganatok mellett szól.
• Gyakori epitheliális hiperplázia vagy epithelialis atypia vagy DCIS. Jóindulatú hiperplázia esetén a CK5 / 6 és CK14 reakciója kimutatható, míg atipikus hiperpláziában és DCIS-ben nem..

Vajon mikroinvazív karcinóma vagy valami más? A myoepithelialis sejtek markereinek használata fontos annak megítélésében, hogy van-e mikroinvazió a carcinomában (invázió a lamináris rétegből a sejtek myoepithelialis rétegébe). A fibroblasztok reaktivitása, a sejtfestés repedése, a vaszkuláris simaizmok myoepithelialis sejtjeinek festése nehézségeket okozhat a megfigyelt kép mikroszkóp alatt történő értelmezésében. Ebben a helyzetben a myoepithelialis sejtek két markerét alkalmazzák, például p63 és SMMHC, vagy ASMA, vagy calponin.

Milyen IHC markereket használnak a mell patológiájának diagnosztikai paneljeiben

Az emlőrákos IHC-vizsgálatok során használt markerek (diagnosztikai panel) nagyban függenek annak a laboratóriumnak a felszerelésétől, amelyben az immunhisztokémiát végzik, és az azt végző orvos tapasztalatától. Az alábbiakban felsoroljuk az egyik klinika ajánlásait, melyeket az IHC paneleknek az emlő patológiájához kell használniuk:

• A simaizom nehéz láncainak miozinja (SMMHC) vagy a kalponin - markerek érzékenyek és specifikusak a myoepithelialis sejtek citoplazmájára;
• A simaizom aktin használható, de ennek ellenére figyelembe kell venni azt, hogy a fibroblasztokban (gyulladás és heg) jelen van;
• A P63 érzékeny és specifikus marker a myoepithelialis sejtmagokra, de a festés szakaszos lehet. Markert kell alkalmazni a myoepithelialis sejtek citoplazmájára, mint például az SMMHC vagy a calponin, hogy elkerüljék a kapott kép értelmezésével kapcsolatos problémákat..

A myoepithelialis sejtek jelenlétének vagy hiányának meghatározásakor p63-at és SMMHC-t vagy kalponint kell használni.

Az immunhisztokémia szerepe a „prognosztikai” és „prediktív” faktorok meghatározásában az emlőrákban

A prognosztikai tényezők információt nyújtanak az emlőrák esetleges viselkedéséről a diagnózis felállításakor, és függetlenek a terápiától. Vagyis ezek segítségével meg lehet ítélni, hogy a rák milyen gyorsan fog haladni, és ennek megfelelően, ennek függvényében, eldöntheti, hogy az egyes helyzetekben milyen mennyiség és kezelés előnyösebb..

Viszont a „prediktív” (prediktív) tényezők olyan információkat szolgáltatnak, amelyek lehetővé teszik a daganat válaszának valószínűségének megítélését egy adott terápiára. Annak ellenére, hogy a prognosztikai és a prediktív tényezőket külön lehet rendszerezni, az emlőrák diagnosztizálásában és osztályozásában ezek mind prognosztikus, mind prediktív.

Például a HER2 magas expressziójának jelenléte. Ha a her2 emlőrák pozitív (nagy mennyiségű HER2 fehérje van a daganatban), akkor agresszíven halad, korai áttéttel a távoli szervek felé. És ha a tumor kis mennyiségben tartalmaz ezt a fehérjét (a her2 mellrák negatív), akkor nem reagál a megcélzott Herceptin gyógyszer alkalmazására.

„Basal” IHC markerek

Van egy felosztás mellrák attól függően, hogy a sejtjei mely géneket expresszálják (génexpressziós profil). A normál emlő bazális vagy myoepithelialis sejtjeire jellemző profilú daganatok megmutatják a "bazális" markerek jelenlétét. Az ilyen daganatok rossz prognózissal rendelkeznek. Ezen "bazális" daganatok többsége teljesen hiányzik az ER, PR (ösztrogén és progeszteron receptorok) és a HER2 fehérjéből. Gyakran áttétet adnak az agyba, a tüdőbe.

A mai napig nincs egyetértés egy immunhisztokémiai profilban (mely IHC markereket kell használni), amely egyértelműen meghatározná ezeket a "bazális" rákokat. Ezek a rossz prognózisú daganatok közé tartozik az úgynevezett "hármas negatív emlőrák", amelyből hiányzik az ER, PR és HER2, de az 5/6 és 14 bazális citokeratinokat, az epidermális növekedési faktor receptor (EGFR) és a C-KIT expresszálja. Expresszálhatják a P-kadherint és gyakran a p63-at is.

A "bazális" emlőrák és a daganatok között hasonlóságok mutatkoznak a BRCA1 mutációban szenvedő nőknél.

Az EGFR gyakran "bazális" rákokban expresszálódik, így az ilyen daganatokban szenvedő betegek számára előnyös lehet az EGFR-gátlókkal történő kezelés.

IHC proliferációs markerek (tumor növekedési sebesség)

A mitózisok számát vagy a mitózisban lévő sejtek százalékos arányát régóta morfológiai "biomarkerként" tekintik a rák prognózisára. Számos IHC marker bizonyítja a sejtek proliferatív aktivitását (a mitózisok száma):

• A Ki67 olyan antigén, amely a sejtciklus minden szakaszában a sejtmagban expresszálódik, és a sejtproliferáció hasznos markere;
• A MIB1 egy olyan ellenanyag, amely formaiban vagy paraffinban rögzített szövetben reagál a Ki-67-gyel;
• PPh3.

Az apoptózis IHC markerei

Az apoptózis vagy a "programozott sejt öngyilkosság" az agresszív daganatok biomarkere. Az apoptózis fehérjéket az IHC segítségével lehet azonosítani:

• Bcl-2;
• Wah;
• Bcl-X.

Egyéb „prediktív” markerek

• p53. A p53 tumor szuppresszor gén (TP53) mutációit az emlőrák 20-30% -ában észlelik. Ezek a génmutációk gyakoribbak örökletes emlőrákos szindrómában szenvedő nőknél, mint szórványos daganatos nőknél. Az emlőrákra genetikai hajlamú betegek esetében p53 teszt ajánlható. A mutációk detektálását a p53-ban szintén az emlőrák kemoterápiára adott válaszának előrejelzőjeként tekintik, de a p53 fehérje immunhisztokémiai kimutatása egy tumorban nem tükrözi a p53 mutáció státuszát..
• Topoizomeráz II alfa. Ez a cél az antraciklin, egy kemoterápiás gyógyszer, amelyet gyakran alkalmaznak az emlőrák kezelésében.